跳孔(Drift)在做科研实验时有没有发现,很多ELISA试剂盒实验因为跳孔而出现倒置现象。其实跳孔的定义是酶标板从左侧到右侧的孔或从上到下的孔内信号出现显著的倒置现象。
一、刚配置试剂的时候中断了,这是否会影响实验结果?
◆ 这可能会导致产生波动的曲线。在移液之前确定所有的标准品或者样品是否配制完好。请在试剂配制完的15-20分钟内滴加入板内。(除非特别说明)
我是否需要一个多道移液器?
◆ 在配制诸如底物,酶结合物,或者稀释液的时候,hao选择连续或多道移液器。
二、如果没有平衡试剂会怎样?
◆ 没有平衡的试剂会导致孔之间温度不均,使整个酶标板的信号产生变异。除非特别说明,试剂一般在使用之前都要平衡至室温。
◆ 每次检测都会有推荐的孵育时间和温度。冷冻的试剂一般需要更长的孵育时间。所以使用说明书上推荐的孵育温度和时间。
三、是否需要盖板?
◆ 参看试剂盒内说明书。如果说明书内的实验步骤中有推荐使用盖板,则在使用时应选用与酶标板配套的盖板,使边缘与酶标板紧密契合。如果盖板的一边突起,则会产生信号的差别。
四、酶标仪的设置怎样影响我的结果?
◆ 对于底物测定,如果读数时间等于或超过2秒/孔,使从孔到后一孔在读书时存在时间上的延误,会导致结果的异变。在底物反应阶段,辣根过氧化物酶会一直作用直到底物反应完全。而由于时间的延误,底物越来越少,底物反应也受到影响。将酶标仪的读数时间设定为1.0秒/孔。
五、是否可以根据自己的方案来调整孵育时间?
◆ 更改孵育时间或温度会导致检测不能达到平衡或过度反应。请按照说明书推荐的孵育时间和温度操作。
◆ 如果同时进行多项检测,对每孔必需分别计时已避免孵育不足或过度孵育。
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