ELISA试剂盒试验稀释血清的过程:
先把蛋白稀释必定的倍数,比如说10倍、20倍稀释(这样能够大体断定一个参数),将抗原进行一系列稀释包被微量反响板,再用必定稀释度的阳性参阅血清和阴性参阅血清进行孵育后洗刷,再加酶结合物进行反响,经孵育洗刷后,加底物溶液显色,停止反响后别离测定O.D值,挑选O.D值≥1.0的那个抗原稀释度为*适包被浓度。
一般总是要挑选那个O.D值稍大于1.0,而不挑选小于1.0的抗原浓度。阴性参阅血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求阳性参阅血清和阴性参阅血清的O.D值有显着差别。
在ELISA试剂盒试验血清为什么要稀释?有两个原因:
1)竞赛按捺比较显着,应稀释竞赛物;
2)以下降非特异性反响,使特异性的抗原抗体反响充分体现出来。
血清稀释用普通的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,当然如果你嫌费事我觉得用生理盐水代替PBS也不大。不论你是用直接竞赛仍是间接竞赛,血清的稀释倍数肯定要事前断定,但也不用一点点,你做一个预试验即可,挑选OD在1.0左右的稀释倍数,即你的竞赛ELISA中阴性孔OD在1.0,这样作出来的曲线比较灵敏。
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