STEP1 选择同一批次的试剂
虽然,每个厂家都会对不同批次的试剂盒进行质量控制检测,但严格得说,每个批次的产品间,都或多或少还是会有可接受范围的差异,有些是10%、有些是15%。所以如果在进行大批量或长时间样品的筛检的时候,能够预先把样本包含重复实验数量和质控样品数量都先估算清楚,购买同一个批次的试剂盒会减少不同批次造成的数据漂移。
STEP2 预包被试剂盒
依照ELISA操作步骤来手工操作包被,虽然并不是特别困难的实验,缺点是受单次手工包被能够运行板数的限制,并且不同次包被出来的板难免会有差异。因此,使用厂家机械化大量预包被好的试剂盒,能够减少手工包被的误差,使孔间跟板间的误差减到最小。
STEP3 精简工作流程
虽然,使用预包被ELISA操作步骤会比自行包被省时省力,但仍需要17个步骤才能获得最后的数据,而且这17个步骤中,每一步都有可能引入误差。
所以,精简操作步骤,就能够进一步减少误差。
STEP4 正确的处理样品跟对照品
许多细胞因子表达量低,很容易在样品运送过程中或是保存不当的情况下降解,导致无法检测到。因此,适当的保存环境、避免超过一次以上的冻解,都是必须要考量的样品处理步骤。
另外,除了空白和/或阴性对照之外,相同的阳性对照放在不同板上同时检测也是非常重要的对照品。
STEP5 可靠设备提高数据一致性清洗是否完全,也会造成ELISA的结果变异。
如果需要清洗多个ELISA板,自动化洗板机除了减少人力、还能够减少误差。
最后,就是读取数据的酶标仪了,一个最佳条件的读板仪必备条件包括:
1、集成的孵育箱和振荡器,可消除使用孵育 ELISA 其他仪器的需求
2、参考校准系统,可跟踪和检测器的自然变化
3、良好的板/孔定位准确度和精度以及验证板运动的方法
4、 选择在板移动和读取吸光度之间使用液体沉降延迟
5、 可以对来自不同制造商的板使用单独的板尺寸图
6、 全自动且连续的诊断,并报告读板器状态和性能信息
7、 特殊功能确保数据质量和数据安全
8、 验证每个运动组件的移动(例如板载、光学头、滤光片轮)
9、 执行外部验证的选项
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