要想得到准确的实验结果，拥有一个无菌的实验环境是非常必要的，今天就给大家介绍一下实验室无菌操作的注意事项。
1、玻璃器皿的消毒和清洁
新购玻璃器皿的处理：新购玻璃器皿应用热番笕水洗刷，流水冲刷，再用1%～2%盐酸溶液浸泡，以除去游离碱，再用水冲刷。对容量较大的器皿如试剂瓶、烧瓶或量具等，经清水洗净后应注入浓盐酸少量，渐渐滚动，使盐酸布满容器内壁数分钟后倾出盐酸，再用水冲刷。
2、污染玻璃器皿的处理
①一般试管或容器可用3%煤酚皂溶液，再煮沸30分钟，亦可用番笕或合成洗涤剂洗刷使尽量发生泡沫，然后用清水冲刷至无番笕停止。然后用少量蒸馏水冲刷。
②细菌培育用的试管和培育皿可先行集中，用1kg/cm2高压灭菌15～30分钟，再用热水洗涤后，用番笕洗刷，流水冲刷。
③吸管运用后应集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小时，逐支用流水重复冲刷，再用蒸馏水冲刷。
④油蜡沾污的器皿，应独自灭菌洗涤，先将沾有油污的物质弃去，倒置于吸水纸上，100℃烘干半小时，再用碱水煮沸，番笕洗涤，流水冲刷。必要时可用二甲苯祛污。
⑤染料沾污的器皿，可先用水冲刷，后用清洁或稀盐酸洗脱染料，再用清水冲刷。一般染色剂呈碱性，所以不宜用番笕的碱水洗 涤。
⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水冲刷，再用番笕或弱碱性煮沸，自然冷却后，流水冲刷。被结核杆菌污染或不易洗净的玻片，可置于清洁液内浸泡后再冲刷。
3、无菌器材和液体的预备
将玻璃用具中的培育皿、培育瓶、试管、吸管等按上述办法洗净烘干后，用一洁净纸包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，装入干净的铝盒或铁盒中，于120℃的干燥箱中干燥灭菌2小时，取出备用。关于手术器械、瓶塞、作业服以及新制造的PBS洗液，则选用高压蒸气灭菌法，即在15磅的条件下，加热20分钟。而关于MEM培育液、小牛血清和消化液等需用G5或G6滤器负压抽滤后运用。
4、在无菌操作过程中，重要的是要坚持作业区的无菌、清洁。
因而，在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并仔细洗手和消毒。在操作时，禁止喧哗，禁止用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的止血钳、镊子等。培育瓶应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需重复用酒精灯烧。
5、常用清洁液的制造法
①重铬酸钾清洁液：可根据不同需要，选用下列的任何一种浓度。先将重铬酸钾溶于水中，再渐渐参加浓硫酸。注意，此时可发生高热，应防止容器破裂。重铬酸钾清洁液除污力强，腐蚀性大，应避免触摸皮肤和衣服。为防止吸收空气的水分而变质，此液应贮存于带盖的容器中。如清洁效能较差，可再参加少量重铬酸钾及浓硫酸，还可持续运用。直到液体变蓝绿色，即不能再用。制造重铬酸钾清洁液时，宜用耐高温的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。运用玻璃器皿时，应特别注意防止发生高热而破裂，切忌用量筒来制造。
②磷酸三钠将其配成5%～10%水溶液，可用于洗涤玻璃器皿上的油污，但经常运用腐蚀玻璃，使器皿表面含糊、粗糙。
以上就是实验室无菌操作的注意事项，为了得到更加准确的实验结果，大家一定要注重构建无菌的实验环境。
|
