自行割取小鼠脑组织
4℃预冷的PBS漂去组织血渍，滤纸吸干残留的PBS；
称重，加入裂解液匀浆（在冰上）；
将得到的匀浆液用液氮反复冻融3次；
室温静置30mins，4℃15000r/min离心1h，取上清，分装，-80℃保存。
简介：目的建立动物组织内P53蛋白的免疫检测分析方法,为P53生物药物的代谢分布研究提供检测手段。方法辣根过氧化物酶（HRP）标记抗P53蛋白单克隆抗体3P40,应用标记后的抗体及重组P53蛋白的检测,建立竞争性ELISA检测方法;应用此方法建立血清样品中P53蛋白标准曲线,测定腹腔注射P53后不同时间小鼠血清中P53浓度。结果利用亲和层析纯化的3P40,进行HRP标记,ELISA检测3P40HRP滴度可达1∶200 000;建立的竞争性ELISA方法可以检测PBST中P53蛋白,灵敏度达30 ng/ml,日内精密度较高,相对标准偏差（RSD）小于5%,体现较好的重复性;分别应用正常小鼠血清、PBST稀释的重组P53蛋白样品进行竞争性ELISA检测,结果显示小鼠血清成分对P53蛋白检测有一定的影响;应用血清制备P53蛋白的标准曲线,检测了腹腔注射P53蛋白后不同时间点小鼠血清样品中的P53蛋白浓度。结论进行了抗P53单克隆抗体3P40的HRP标记,建立了竞争性ELISA方法,可用于P53蛋白药物血药浓度检测。
样本暂时不测时负80冷冻保存，一般可以放置6个月左右，负20可放3个月，（若被检物质见光易分解则需避光保存）制备好的匀浆液需当天进行测定（提取液不是被检物质的zui适环境） 1 准确称取组织重量按重量（g）：体积（ml）=1：N的比例加N倍体积的生理盐水（或PBS）（推荐N=9），冰水浴匀浆（机械式，手动等，超声不太推荐），制备成一定浓度的匀浆液，离心（根据被检物质的具休要求，推荐3000转/分左右），取上清待测2 由于匀浆（提取）过程中会产生的一定的系统误差，需对其进行较正可根据测其上清液中蛋白浓度进行较正
|
