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    ELISA实验疑难解析
    Article Source:江苏酶标生物科技有限公司Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd   add time:2022/11/22 8:28:32 CTR:847

    大家好我是酶标生物小编,今天我来和大家说一说ELISA实验疑难解析,希望对你们有所帮助哦!

    1、显色极浅或不显色

    1)漏加底物成分、底物失效、底物配制浓度计算错误;

    2)整个ELISA过程中存在抗原或抗体不匹配;

    3)整个ELISA过程中样品稀释过度;

    4)稀释体系错误,如使用含蛋白质成分的试剂进行包被。

    2、全板阳性

    1)酶标抗原或抗体浓度过高,尝试降低浓度;

    2)使用的封闭试剂不正确,或者未封闭;

    3)酶标抗原或抗体与体系中其他试剂有结合;

    4)底物被酶标抗原或抗体污染。

    3、不均匀显色

    1)酶标板质量问题,重新检测酶标板均一性;

    2)包被或加样过程中有部分孔漏加、少加等情况,可能是操作者不细心,也可能是移液器漏气;

    3)加样时移液器打入太多气泡;

    4)选购的酶标板不正确,可能误选其他用途的板子;

    5)温育过程中板子叠放过厚;

    6)加样或稀释过程中试剂没有充分混匀,或稀释梯度计算错误;

    7)洗板失误,部分孔未加洗涤液或洗涤液加入去垢剂后未充分混匀,或洗涤过程中带入气泡。

     

    4、显色过快

    1)酶标抗原或抗体浓度过高;

    2)某一试剂浓度过高。

    5、显色过慢

    1)酶标抗原或抗体浓度过底,或者标记效率低,或者标记后免疫活性受影响;

    2)试剂被污染,如HRP酶标记的抗原或抗体被叠氮钠污染;

    3)反应温度过低;

    4)底物缓冲液pH不正确。

    6、背景深

    1)酶标抗原或抗体浓度过高;

    2)抗体的非特异性结合;

    3)抗原或抗体不纯;

    4)二抗的种属交叉识别。

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