大家好我是酶标生物小编，今天我来和大家说一说ELISA实验疑难解析，希望对你们有所帮助哦！
1、显色极浅或不显色
（1）漏加底物成分、底物失效、底物配制浓度计算错误；
（2）整个ELISA过程中存在抗原或抗体不匹配；
（3）整个ELISA过程中样品稀释过度；
（4）稀释体系错误，如使用含蛋白质成分的试剂进行包被。
2、全板阳性
（1）酶标抗原或抗体浓度过高，尝试降低浓度；
（2）使用的封闭试剂不正确，或者未封闭；
（3）酶标抗原或抗体与体系中其他试剂有结合；
（4）底物被酶标抗原或抗体污染。
3、不均匀显色
（1）酶标板质量问题，重新检测酶标板均一性；
（2）包被或加样过程中有部分孔漏加、少加等情况，可能是操作者不细心，也可能是移液器漏气；
（3）加样时移液器打入太多气泡；
（4）选购的酶标板不正确，可能误选其他用途的板子；
（5）温育过程中板子叠放过厚；
（6）加样或稀释过程中试剂没有充分混匀，或稀释梯度计算错误；
（7）洗板失误，部分孔未加洗涤液或洗涤液加入去垢剂后未充分混匀，或洗涤过程中带入气泡。
4、显色过快
（1）酶标抗原或抗体浓度过高；
（2）某一试剂浓度过高。
5、显色过慢
（1）酶标抗原或抗体浓度过底，或者标记效率低，或者标记后免疫活性受影响；
（2）试剂被污染，如HRP酶标记的抗原或抗体被叠氮钠污染；
（3）反应温度过低；
（4）底物缓冲液pH不正确。
6、背景深
（1）酶标抗原或抗体浓度过高；
（2）抗体的非特异性结合；
（3）抗原或抗体不纯；
（4）二抗的种属交叉识别。
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