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    ELISA夹心法优势和用途
    Article Source:江苏酶标生物科技有限公司Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd   add time:2023/1/30 17:33:58 CTR:893

    ELISA大致分为五种类型:直接法、间接法、竞争法、夹心法、捕获包被法。在ELISA试剂盒中用得比较多的是双抗体夹心法、竞争法和间接法。那么接下来酶标小编就先和你们谈谈双抗夹心法吧。

    双抗体夹心法中抗原的2个不同的抗原表位被两个抗体-捕捉抗体和检测抗体,分别结合。捕捉抗体固定于载体即酶标板上,检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的捕捉抗体通常是单抗,偶尔有用多抗做为捕捉抗体的情况,但很少见,因为以多抗作为捕捉抗体容易出现交叉反应而降低特异性。检测抗体通常为多抗,在科研试剂盒中经常用到生物素标记的山羊多抗,再让生物素标记的多抗与HRP标记的亲和素或者链霉亲和素结合,然后再加HRP也就是辣根过氧化物酶的底物,通常是TMB反应显色,这种方法是在传统的HRP酶标记抗体的双抗体夹心法ELISA中引入了生物素-亲和素放大系统。

     

     

    不过也有用单抗做检测抗体的情况,尤其是在科研中。双抗体夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势,但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测,主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAgHBeAgAFP等疾病相关的,以及在科研中检测细胞因子等。由于双抗体夹心法特异性高,在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应,称为双抗体夹心一步法,因为操作时间短,在生产中有很大优势。但双抗体夹心一步法要特别注意ELISA中的钩状效应(hook ffect),因为此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而无法形成夹心复合物,此时测出的结果将低于实际含量甚至是阴性结果。因此,如果使用双抗体夹心一步法测定样本中抗原含量时要注意测量的线性范围,另外使用高亲和力的单抗也可削弱钩状效应。

    双抗原夹心法中抗原被包被于固相,检测样本中的抗体结合于抗原后,使用酶标的抗原进行结合及后续反应,可以用来测定样本中的抗体。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备,需要根据抗原结构进行设计,在医学检验上测定抗HBsAg抗体采用的就是此法,检测时被测样本不需要稀释即可直接进行测定

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