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    ELISA实验中阴性本底的形成原因
    Article Source:江苏酶标生物科技有限公司Jiangsu Meibiao Biotechnology Co., Ltd   add time:2023/9/8 11:08:07 CTR:642

    在酶联固相免疫实验中,尤其在间接ELISA法中,经常会碰到阴性本底的问题。主要是本底过高和不同标本的本底值差异较大。本底或称背景,是ELISA中的非特异性显色。底物未经过酶作用而呈现的颜色称为空白。底物液如配制不当会出现一定的空白值。这个空白值只要不太高(A<0.05),可从各测定值中减除,并不影响实验结果。这里讨论的是不含待测抗原或抗体的阴性标本在ELISA中出现的本底。从理论上来说,只有阴性标本最终才能引起显色反应,那么,为什么会出现本底呢?接下来就为大家介绍一下阴性本底的形成原因。

    固相载体的吸附:在酶免疫测定中,ELISA的特点是利用分离游离和结合的酶结合物的手段。固相载体与吸附在其上的抗原或抗体形成固相抗原或固相抗体,即免疫吸附剂(Immu-nosorbent)。通常所用的固相载体聚苯乙烯其表面主要是疏水基团,通过疏水键与蛋白质结合。这种物理性吸附是非特异性的,虽然蛋白质的分子量、等电点、浓度等对吸附的量有一定的影响,但总的来说各种蛋白质均能吸附在聚苯乙烯载体的表面。因此除在包被时有目的地使抗原或抗体吸附在载体上外,在ELISA各个步骤中均有可能发生干扰物质的吸附,使最终产生与受检抗原-抗体反应无关的显色,这是形成阴性本底的主要原因。

    只有正确认识阴性本底的形成原因,才能处理在实验过程中出现的相关问题,对症下药,所以大家一定要多加注意。


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