细节决定成败,在ELISA实验操作中,误差分有系统误差、偶然误差、过失误差,而一个小小的误差都有可能影响到实验,很多人往往因为一个小细节,一个误差没能让实验成功。那么实验误差概率应该如何缩小?今天就向大家分享一些妙招,优化实验,减少误差。
1、使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。
2、仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进。
3、洗涤彻底,如若洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性。洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。
4、严控反应时间,反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。
5、留意试剂盒保存期,过保存期的试剂不能使用。
6、评估试剂的实用性,试剂的稳定与否。在试剂启用前,应进行阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。
7、严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。
8、加样要准确、快速。如果加样不准确,酶生成物的量不能确定,直接影响显色结果。显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。
以上就是减少ELISA实验误差的小妙招,学会了这些小妙招,实验会更加顺利,结果会更加准确,你学会了吗?
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