通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触,使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到,加样时要避免出现气泡,那么气泡会对实验有什么影响呢?我们又该如何避免气泡的产生呢?
通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围,导致孔中液体不能与孔壁有效接触。使孔内反应不均一。
2、包被时有气泡的话,将导致包被不完全,实际包被量下降,最后结果呈现弱阳性甚至假阴性。
3、封闭时有气泡的话,将导致大量未结合位点的存在,引起非特异性结合,造成本底增高,结果呈现假阳性。
4、加样时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合,结果呈现弱阳性甚至假阴性。
5、加二抗时有气泡的话,抗原抗体不能有效的结合,结果呈现弱阳性甚至假阴性(竞争法相反----假阳性)。
6、加显色液时有气泡的话,造成显色不完全。
7、加终止液时有气泡的话,会导致不能完全终止反应,影响酶标仪比色,也会导致OD值增高。
8、洗涤时有气泡的话,非特异性结合物不能完全洗去,做无用功。
避免方法:
1、加样时尽量靠近孔底(不要接触孔底),用力均匀,不要过快过猛。
2、封闭时一定要加满孔。
3、洗涤时一定要加满孔(重要),气泡会浮上来最终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。
由此看来,气泡对ELISA实验会产生很大的影响,所以各位科研人员要按照要求进行实验,避免气泡的产生,影响最终的实验结果。
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